AAT Bioquest iFluor® 350 succinimidyl ester

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iFluor® 350/405/488/555/594/633/647/546/568/430/790/647 succinimidyl ester

我们北京云肽生物科技有限公司作为AAT Bioquest公司的特约经销商为客户提供，正规进口，保证原装正品，货期稳定，折扣好的服务标准。

美国AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家为从事生命科学研究、诊断研发及药物开发的科学家研发、生产和销售生物分析研究试剂和试剂盒的公司。公司致力于光谱学检测领域，包括吸收（颜色），荧光和发光技术。AAT Bioquest的产品帮助quan世界的科学家和生物医药研究者更好的了解生物化学，免疫学，细胞生物学和分子生物学等领域。AAT Bioquest会不断介绍新产品，快速的丰富各个领域的产品。

AAT Bioquest  71020  iFluor® 350 succinimidyl ester  100 ug

AAT Bioquest  71021  iFluor® 405 succinimidyl ester  100 ug

AAT Bioquest  71023  iFluor® 488 succinimidyl ester  100 ug

AAT Bioquest  71028  iFluor® 555 succinimidyl ester  100 ug

AAT Bioquest  71029  iFluor® 594 succinimidyl ester  100 ug

AAT Bioquest  71030  iFluor® 633 succinimidyl ester  100 ug

AAT Bioquest  71031  iFluor® 647 succinimidyl ester  100 ug

AAT Bioquest  71048  iFluor® 546 succinimidyl ester  100 ug

AAT Bioquest  71049  iFluor® 568 succinimidyl ester  100 ug

AAT Bioquest  71052  iFluor® 430 succinimidyl ester  100 ug

AAT Bioquest  71368  iFluor® 790 succinimidyl ester  100 ug

AAT Bioquest  71560  iFluor® 647 succinimidyl ester  100 ug

 AAT Bioquest  iFluor® 350 succinimidyl ester

产品说明：

Bioquest的iFluor®染料针对标记蛋白质，特别是抗体进行了优化。这些染料明亮，光稳定，对蛋白质的淬灭最小。它们可以被荧光仪器的主要激光线（例如，350、405、488、555 和 633 nm）很好地激发。iFluor® 350染料的荧光激发和发射最大值分别为~345nm和~450nm。这些光谱特性使其成为AMCA和Alexa Fluor 350标记染料（Alexa Fluor®®是Invitrogen的商标）的jue佳替代品。iFluor® 350 SE相当稳定，对蛋白质氨基基团表现出良好的反应性和选择性。

示例协议

储备溶液的制备

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。

1. 蛋白质储备液（溶液A）

将 100 μL 反应缓冲液（例如，pH ~1.1 的 9 M 碳酸钠溶液或 0 M 磷酸盐缓冲液）与 900 μL 目标蛋白溶液（例如抗体、蛋白质浓度>如果可能，为 2 mg/mL）混合，得到 1 mL 蛋白质标记储备溶液。

注意蛋白质溶液（溶液A）的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH值低于8.0，则使用8 M碳酸qing钠溶液或0 M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至1.1-9.0的范围。

注意蛋白质应溶解在pH 1.7-2.7的4X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。如果蛋白质溶解在Tris或甘an酸缓冲液中，则必须用1X PBS（pH 7.2-7.4）透析，以除去广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（如**铵和**铵）。

注意 不纯抗体或用牛血清白蛋白 （BSA） 或明胶稳定的抗体不会很好地标记。叠***或硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。叠***或硫柳汞可以通过透析或离心柱去除，以获得最佳标记结果。

注意 如果蛋白质浓度低于 2 mg/mL，则偶联效率会显着降低。为了获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为 2-10 mg/mL。

2. iFluor™ 350 SE储备液（溶液B）

将无水DMSO加入iFluor™ 350 SE的小瓶中，制成10 mM储备溶液。通过移液或涡旋充分混合。

注意 在开始偶联之前准备染料储备溶液（溶液B）。请及时使用。延长染料储备溶液的储存可能会降低染料活性。溶液B可以在避光和潮湿的情况下在冰箱中储存两周。避免冻融循环。

实验方案样本

该标记方案是为山羊抗小鼠IgG与iFluor™ 350 SE的偶联物开发的。您可能需要进一步优化您的特定蛋白质。

注意每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能会对其结合亲和力产生不利影响，而低染料/蛋白质比例的蛋白质偶联物会降低灵敏度。

运行偶联反应

1. 使用溶液 B（染料）/溶液 A（蛋白质）的摩尔比为 10：1 作为起点：将 5 μL 染料储备溶液（溶液 B，假设染料储备溶液为 10 mM）加入蛋白质溶液（95 μL 溶液 A）的小瓶中，有效摇匀。假设蛋白质浓度为0mg / mL，蛋白质的分子量为~05KD，蛋白质的浓度为~10.200mM。

注意 我们建议使用溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）的摩尔比为10：1。如果太少或太高，请分别以 5：1、15：1 和 20：1 确定最佳染料/蛋白质比例。

2. 继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。

纯化偶联

以下方案是使用Sephadex G-25色谱柱纯化的染料-蛋白质偶联物的示例。

1. 根据制造说明制备Sephadex G-25色谱柱。

2. 将反应混合物（来自“运行共轭反应"）加载到Sephadex G-25色谱柱的顶部。

3. 一旦样品刚好在顶部树脂表面下方运行，就加入PBS（pH 7.2-7.4）。

4. 向所需样品中加入更多PBS（pH 7.2-7.4）以完成色谱柱纯化。合并含有所需染料-蛋白质偶联物的级分。

注意 为了立即使用，染料-蛋白偶联物需要用染色缓冲液稀释，并等分用于多次使用。

注意 对于长期储存，染料-蛋白质偶联物溶液需要浓缩或冷冻干燥。

 AAT Bioquest  iFluor® 350 succinimidyl ester

产品订购信息：