AAT Bioquest Amplite荧光过氧化物酶试剂盒

AAT Bioquest 11552/11553 Amplite® Fluorimetric Peroxidase (HRP) Assay Kit *Red/*Near Fluorescence*

我们北京云肽生物科技有限公司作为AAT Bioquest公司的特约经销商为客户提供，正规进口，保证原装正品，货期稳定，折扣好的服务标准。

美国AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家为从事生命科学研究、诊断研发及药物开发的科学家研发、生产和销售生物分析研究试剂和试剂盒的公司。公司致力于光谱学检测领域，包括吸收（颜色），荧光和发光技术。AAT Bioquest的产品帮助quian世界的科学家和生物医药研究者更好的了解生物化学，免疫学，细胞生物学和分子生物学等领域。AAT Bioquest会不断介绍新产品，快速的丰富各个领域的产品。

AAT Bioquest 11552 Amplite® Fluorimetric Peroxidase (HRP) Assay Kit *Red Fluorescence*  500 Tests

AAT Bioquest  11553  Amplite® Fluorimetric Peroxidase (HRP) Assay Kit *Near Infrared Fluorescence*  500 Tests

 AAT Bioquest Amplite荧光过氧化物酶试剂盒

AAT Bioquest 11552 Amplite® Fluorimetric Peroxidase (HRP) Assay Kit *Red Fluorescence*  500 Tests，产品说明：

过氧化物酶是一种小分子（MW ~40 KD），通常可以以4：1的比例与抗体偶联。由于其体积小，它很少引起抗体/抗原复合物形成的空间位阻问题。与其他标记酶相比，过氧化物酶价格低廉。与过氧化物酶相关的主要缺点是它们对许多防腐剂（例如叠***）的耐受性低，即使在低浓度下也能使过氧化物酶活性失活。HRP 偶联物可广泛用于 ELISA、免疫组织化学技术以及北部、南部和西部印迹分析中的二级检测试剂。我们在一步法、均质、无洗涤检测系统中提供这种快速（10 分钟）HRP 检测。该试剂盒可用于 ELISA、表征酶反应动力学和氧化酶抑制剂的高通量筛选等。该试剂盒提供优化的“混合和读取"检测方案，与 HTS 液体处理仪器兼容。

平台

吸光度酶标仪

吸光度 576 ±5 纳米

推荐板 清除底部

荧光酶标仪

Excitation 540 纳米

Emission 590 纳米

Cutoff     575 纳米

推荐板 纯黑色

组件

组分A：Amplite™红过氧化物酶底物 1瓶

组分B：H2O2 1 瓶（3% 稳定溶液，200 μL）

组分C：检测缓冲液 1 瓶 （100 mL）

组分D：辣根过氧化物酶 1瓶（20单位）

构成部分E：DMSO 1 瓶 （0.5 mL）

示例协议

一目了然

协议摘要

1. 制备 HRP 标准品和/或测试样品 （50 μL）

2. 加入 HRP 工作溶液 （50 μL）

3. 在室温下孵育 10 - 30 分钟

4. 在Ex/Em = 540/590 nm（截止值= 575 nm）下监测荧光强度

重要事项 在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。组分A在DTT和β-巯基乙*等硫醇存在下不稳定。浓度高于10μM的硫醇的存在会显着降低测定动态范围。NADH和谷胱gan肽（还原形式：GSH）可能会干扰测定。

储备溶液的制备

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。

1. Amplite™ 红过氧化物酶底物储备溶液 （100X）

将 250 μL DMSO（组分 E）加入到安培红色过氧化物酶底物（组分 A）的小瓶中，制成 100X Amplite ™™红过氧化物酶底物储备溶液。应及时使用储备溶液。避光保存。

2. HRP 标准溶液 （20 U/mL）

将 1 mL 测定缓冲液（组分 C）加入辣根过氧化物酶（组分 D）小瓶中，制成 20 U/mL HRP 标准溶液。

3. H₂O₂储备溶液 （20 mM）

加入 22.7 μL 的 3% H₂O₂（0.88 M，组分 B）放入 977 μL 检测缓冲液（组分 C）中，制成 20 mM H₂O₂储备液 .注意：稀释后的 H₂O₂溶液不稳定。未使用的部分应丢弃。

标准溶液的制备

人力资源生产标准

在 1 μL 测定缓冲液（组分 C）中加入 20 μL 1999 U/mL HRP 标准溶液，得到 10 mU/mL HRP 标准溶液 （SD7）。取 10 mU/mL HRP 标准溶液 （SD7） 并进行 1：3 连续稀释，以获得带有测定缓冲液（组分 C）的连续稀释的 HRP 标准品 （SD6 - SD1）。

工作溶液的制备

加入 50 μL 100X Amplite™ 红色过氧化物酶底物储备溶液和 50 μL 20 mM H2O2将溶液储备到 4.9 mL 的测定缓冲液（组分 C）中，制成 HRP 工作溶液。避光保存。

实验方案样本

表 1. HRP标准品和测试样品在纯黑色96孔微孔板中的布局。SD= HRP 标准品（SD1 - SD7，0.01 至 10 mU/mL）;BL=空白控件;TS=测试样品。

表 2. 每个孔的试剂组成。

1. 根据表1和表2中提供的布局制备HRP标准品（SD），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于 384 孔板，每孔使用 25 μL 试剂而不是 50 μL。 注意：高水平的 HRP（例如，>100 mU/mL 最终浓度）可能会由于 Amplite™ Red 的过度氧化（到非荧光灯）而导致荧光信号降低。

2. 向HRP标准品、空白对照和测试样品的每个孔中加入50 μL HRP工作溶液，使HRP测定总体积为100 μL/孔。对于 384 孔板，向每个孔中加入 25 μL HRP 工作溶液，总体积为 50 μL/孔。

3. 将反应在室温下孵育10至30分钟，避光。

4. 使用荧光板读数器在激发= 540±10nm，发射= 590±10nm（最佳Ex / Em = 540 / 590 nm，截止= 575 nm）监测荧光增加。注意：板的内容物也可以转移到白色透明底板上，并由吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读取。与荧光读数相比，吸收检测的灵敏度较低。

AAT Bioquest  11553  Amplite® Fluorimetric Peroxidase (HRP) Assay Kit *Near Infrared Fluorescence*  500 Tests，产品说明：

过氧化物酶是一种小分子（MW ~40 KD），通常可以以4：1的比例与抗体偶联。由于其体积小，它很少引起抗体/抗原复合物形成的空间位阻问题。与其他标记酶相比，过氧化物酶价格低廉。与过氧化物酶相关的主要缺点是它们对许多防腐剂（例如叠***）的耐受性低，即使在低浓度下也能使过氧化物酶活性失活。HRP 偶联物可广泛用于 ELISA、免疫组织化学技术以及北部、南部和西部印迹分析中的二级检测试剂。我们在一步法、均质、无洗涤检测系统中提供这种快速（10 分钟）HRP 检测。该试剂盒使用我们的近红外荧光HRP基质Amplite® IR。Amplite® IR 产生的物质最大吸收为 647 nm，最大发射波长为 670 nm。这种近红外吸收和荧光最大限度地减少了通常由生物样品的自吸收和/或自发荧光引起的测定背景，这些样品很少吸收超过600 nm的光。该试剂盒可用于 ELISA、表征酶反应动力学和氧化酶抑制剂的高通量筛选等。该试剂盒提供优化的“混合和读取"检测方案，与 HTS 液体处理仪器兼容。

平台

吸光度酶标仪

吸光度 647 ±5 纳米

推荐板 清除底部

荧光酶标仪

Excitation 640 纳米

Emission 680 纳米

Cutoff     665 纳米

推荐板 纯黑色

组件

组分A：Amplite™红过氧化物酶底物 1瓶

组分B：H₂O₂ 1 瓶（3% 稳定溶液，200 μL）

组分C：检测缓冲液 1 瓶 （100 mL）

组分D：辣根过氧化物酶 1瓶（20单位）

构成部分E：DMSO 1 瓶 （0.5 mL）

示例协议

一目了然

协议摘要

5. 制备 HRP 标准品和/或测试样品 （50 μL）

6. 加入过氧化物酶工作溶液（50 μL）

7. 在室温下孵育 30 - 60 分钟

8. 在Ex/Em = 640/680 nm（截止值= 665 nm）下监测荧光强度

重要事项 在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。组分A在DTT和β-巯基乙*等硫醇存在下不稳定。浓度高于10μM的硫醇的存在会显着降低测定动态范围。NADH和谷胱gan肽（还原形式：GSH）可能会干扰测定。

储备溶液的制备

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。

1. Amplite™ IR 过氧化物酶底物储备溶液 （100X）

将 250 μL DMSO（组分 E）加入到安培 IR 过氧化物酶底物（组分 A）的小瓶中，制成 100X 安培™™红外过氧化物酶底物储备溶液。

2. HRP 标准溶液 （20 U/mL）

将 1 mL 测定缓冲液（组分 C）加入辣根过氧化物酶（组分 D）小瓶中，制成 20 U/mL HRP 标准溶液。

3. H2O2储备溶液 （20 mM）

加入 22.7 μL 的 3% H2O2（0.88 M，组分 B）放入 977 μL 检测缓冲液（组分 C）中，制成 20 mM H2O2储备溶液。注意：稀释后的 H2O2溶液不稳定。未使用的部分应丢弃。

标准溶液的制备

人力资源生产标准

将 15 μL 20 U/mL HRP 标准溶液加入 985 μL 检测缓冲液（组分 C）中，得到 300 mU/mL HRP 标准溶液 （SD7）。取300 mU/mL HRP标准溶液（SD7）并进行1：3连续稀释，以获得带有测定缓冲液（组分C）的连续稀释HRP标准品（SD6 - SD1）。

工作溶液的制备

加入 50 μL 100X Amplite™ IR 过氧化物酶底物储备溶液和 50 μL 20 mM H₂O₂将溶液储备到 4.9 mL 的检测缓冲液（组分 C）中，制成过氧化物酶工作溶液。避光保存。

实验方案样本

表 1. HRP标准品和测试样品在纯黑色96孔微孔板中的布局。SD=HRP标准品（SD1 - SD7，0.41至300 mU/mL），BL=空白对照，TS=测试样品。

表 2. 每个孔的试剂组成。

1. 根据表1和表2中提供的布局制备HRP标准品（SD），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于 384 孔板，每孔使用 25 μL 试剂而不是 50 μL。

2. 向HRP标准品、空白对照和测试样品的每个孔中加入50 μL过氧化物酶工作溶液，使总过氧化物酶测定体积为100 μL/孔。对于 384 孔板，向每个孔中加入 25 μL 过氧化物酶工作溶液，总体积为 50 μL/孔。

3. 将反应在室温下孵育30至60分钟，避光。

4. 使用荧光板读数器在激发= 600 - 650 nm，发射= 650 - 690 nm（最佳Ex / Em = 640/680 nm，截止= 665 nm）下监测荧光增加。注意： 板的内容物也可以转移到白色透明底板上，并由吸光度酶标仪在647±5nm的波长下读取。与荧光读数相比，吸收检测的灵敏度较低。

  AAT Bioquest Amplite荧光过氧化物酶试剂盒

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