AATBioquestCell Meter过氧化氢测定试剂盒

AAT Bioquest 11503/11504 Cell Meter™ Intracellular Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Green/*Blue Fluorescence*

我们北京云肽生物科技有限公司作为AAT Bioquest公司的特约经销商为客户提供，正规进口，保证原装正品，货期稳定的服务标准。

美国AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家为从事生命科学研究、诊断研发及药物开发的科学家研发、生产和销售生物分析研究试剂和试剂盒的公司。公司致力于光谱学检测领域，包括吸收（颜色），荧光和发光技术。AAT Bioquest的产品帮助quan世界的科学家和生物医药研究者更好的了解生物化学，免疫学，细胞生物学和分子生物学等领域。AAT Bioquest会不断介绍新产品，快速的丰富各个领域的产品。

AAT Bioquest  11503 Cell Meter™ Intracellular Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Green Fluorescence* 100 Tests

AAT Bioquest  11504 Cell Meter™ Intracellular Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Blue Fluorescence* 100 Tests

 AATBioquestCell Meter过氧化氢测定试剂盒

AAT Bioquest  11503 Cell Meter™ Intracellular Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Green Fluorescence* 100 Tests，产品说明：

过氧化*（H2O2）是一种活性氧代谢副产物，可作为许多氧化应激相关状态的关键调节剂。它涉及许多与哮喘、动脉粥样硬化、糖尿病血管病变、骨质疏松症、许多神经退行性疾病和唐氏综合症有关的生物事件。也许过氧化*生物学最有趣的方面是最近的报道，即抗体具有将分子氧转化为过氧化*的能力，有助于免疫系统的正常识别和破坏过程。测量这种反应性物质将有助于确定氧化应激如何调节不同的细胞内途径。该细胞计™过氧化*检测试剂盒使用我们du特的OxiVision™ Green过氧化*传感器来量化活细胞中的过氧化*。OxiVision™ Green是细胞渗透性的，当它与过氧化*反应时会产生绿色荧光。该试剂盒是一种优化的“混合和读取"检测形式，与 HTS 液体处理仪器兼容。

组件

组件 A： 1瓶

组分B：H2O2 1 瓶（3% 稳定溶液，200 μL）

组分C：检测缓冲液 1 瓶 （20 mL）

组件D：二甲基丙*酸甲* 1 瓶 （200 μL）

示例协议

一目了然

溶液分析方案摘要

1. 准备并添加 Amplite™ 绿色过氧化物传感器工作溶液 （50 μL）

2. 添加 H2O2标准品或测试样品 （50 μL）

3. 在室温下孵育 15 - 60 分钟

4. 读取Ex/Em = 490/525 nm时的荧光强度（截止= 515 nm）

重要说明

在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒成分。

活细胞检测方案摘要

1. 在生长培养基中制备细胞

2. 用Amplite™绿色过氧化物传感器工作溶液对细胞进行染色，并孵育所需的时间

3. 用测试化合物处理细胞

4. 在Ex/Em = 490/525 nm（截止= 515 nm）下监测荧光强度，底部读取模式

重要说明

Amplite™ 绿色过氧化物传感器可以被动加载到活细胞中并报告细胞内 H 的微摩尔变化2O2浓度。以下是建议的显微镜成像方案，可以修改以满足特定的研究需求。

储备液的制备

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。

1. 安培绿色过氧化物传感器储备溶液 （250X）：

将 50 μL DMSO（组分 D）加入安培绿色过氧化物传感器（组分 A）的小瓶中，制成 250X 安培™™绿色过氧化物™传感器储备溶液。避光。

2. H₂O₂标准溶液 （20 mM）：

加入 22.7 μL 的 3% H2O2（0.88 M，组分 B）放入 977 μL 检测缓冲液（组分 C）中，制成 20 mM H₂O₂标准解决方案。注意：稀释后的H₂O₂标准溶液不稳定。未使用的部分应丢弃。

标准溶液的制备

H₂O₂ 标准

加入 50 μL 20 mM H2O2标准溶液到 950 μL 检测缓冲液（组分 C）中，得到 1000 μM H₂O₂标准解决方案。取 1000 μM H₂O₂标准溶液并进行 1：3 连续稀释以获得连续稀释的 H₂O₂标准品（HS1 - HS7）与测定缓冲液（组分C）。

工作溶液的制备

将 20 μL 250X 安培™绿色过氧化物传感器储备溶液加入 5 mL 检测缓冲液（组分 C）中，制成 Amplite™ 绿色过氧化物传感器工作溶液。

实验方案样本

1. 准备H₂O₂标准品（HS）、空白对照（BL）和测试样品（TS）根据表1和表2中提供的布局。对于 384 孔板，每孔使用 25 μL 试剂而不是 50 μL。

2. 向每个 H 孔中加入 50 μL Amplite™ 绿色过氧化物传感器工作溶液₂O₂标准、空白对照和测试样品，使总H₂O₂测定体积为 100 μL/孔。对于 384 孔板，将 25 μL Amplite™ 绿色过氧化物传感器工作溶液添加到每个孔中，总体积为 50 μL/孔。

3. 将反应在室温下孵育15至30分钟，避光。

4. 使用荧光酶标仪监测荧光增加，激发= 490±10，发射= 520±10nm（最佳Ex / Em = 490 / 525 nm，截止= 515 nm）。

运行H₂O₂活细胞测定：

1. 根据需要激活单元格。

2. 用PBS缓冲液洗涤细胞，用100μL/孔Amplite™绿色过氧化物传感器工作溶液孵育细胞5至60分钟或您想要的时间。对于 384 孔板，加入 25 μL/孔的 Amplite™ 绿色过氧化物传感器工作溶液。注意：对于动力学测量，可以在添加处理之前对细胞进行染色。

3. 使用荧光板读数器（底部读取模式）在Ex / Em = 490 / 525 nm（截止= 515 nm）下监测荧光增加，或使用FITC通道用荧光显微镜对荧光变化进行成像。

AAT Bioquest  11504 Cell Meter™ Intracellular Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Blue Fluorescence* 100 Tests，产品说明：

过氧化*是一种活性氧代谢副产物，可作为许多氧化应激相关状态的关键调节剂。它涉及许多与哮喘、动脉粥样硬化、糖尿病血管病变、骨质疏松症、许多神经退行性疾病和唐氏综合症有关的生物事件。这种反应性物质的测量有助于确定氧化应激如何调节各种细胞内途径。该细胞计™细胞内荧光过氧化*检测试剂盒使用我们du特的OxiVision™ Blue过氧化物传感器来量化活细胞中的过氧化*。OxiVision™ 蓝色过氧化物传感器具有细胞渗透性，与过氧化*反应时会产生蓝色荧光。该试剂盒提供了一种灵敏的工具，用于监测活细胞中的过氧化*水平，并经过优化，可用于荧光显微镜。

组件

组件 A：OxiVision™ 蓝色过氧化物传感器 1瓶

组分B：检测缓冲液 1 瓶 （20 mL）

组件C：DMSO 1 瓶 （100 μL）

示例协议

一目了然

协议摘要

1. 在生长培养基中制备细胞

2. 使用OxiVision™蓝色过氧化物传感器对细胞进行染色

3. 用测试化合物处理细胞

4. 使用 DAPI 滤光片或防爆/电磁 = 405/450 nm 监测荧光强度

重要说明

在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒成分。

储备液的制备

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。

1. OxiVision 蓝色过氧化物传感器储备溶液 （500X）：

将 40 μL DMSO（组分 C）加入 OxiVision 蓝色过氧化物传感器（组分 A）的小瓶中，充分混合制成 500X OxiVision™™™ 蓝色过氧化物传感器储备溶液。注意：20 μL 重构的 OxiVision™ 蓝色过氧化物传感器储备溶液足以用于 1 个板。应及时使用储备溶液。避光。

工作溶液的制备

将 10 μL 的 500X OxiVision 蓝色过氧化物传感器储备溶液加入 500 μL 检测缓冲液（组分 B）中，并充分混合，制成 OxiVision™™ 蓝色过氧化物传感器工作溶液。注意：此OxiVision™ 蓝色过氧化物传感器工作溶液不稳定;使用前根据需要准备。

实验方案样本

1. 在 10 孔细胞板中每孔 96 μL 细胞培养物中加入 2 μL/孔（5 孔板）或 384.90 μL/孔（96 孔板）的 OxiVision™ 蓝色过氧化物传感器工作溶液，或在 22 孔细胞板中每孔加入 5.384 μL 细胞培养物。注意：染色前无需清洗细胞。建议在全培养基中对细胞进行染色。

2. 用测试化合物在全培养基中或在所需的缓冲液中在 37°C 下处理细胞所需的时间。对于对照样品（未处理的细胞），加入相应量的复合缓冲液。注意：建议在全培养基中处理细胞。但是，如果测试化合物对血清敏感，则可以在治疗前吸走生长培养基和血清因子。抽吸后，将1X Hank的盐溶液和20 mM Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液添加到细胞中。或者，可以在无血清培养基中处理细胞。我们在100°C的全培养基中用37μM过氧化*处理Jurkat细胞90分钟以诱导过氧化*。

3. 用DPBS洗涤细胞1-2次，并更换为100 uL /孔（用于96孔板）或25 uL /孔（用于384孔板）测定缓冲液（组分C）。

4. 使用带有DAPI滤光片的荧光显微镜拍摄图像。

 AATBioquestCell Meter过氧化氢测定试剂盒

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