AAT Bioquest iFluor® 488 succinimidyl ester

AAT Bioquest 1023/1029/1030 iFluor® 488/594/633 succinimidyl ester

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美国AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家为从事生命科学研究、诊断研发及药物开发的科学家研发、生产和销售生物分析研究试剂和试剂盒的公司。公司致力于光谱学检测领域，包括吸收（颜色），荧光和发光技术。AAT Bioquest的产品帮助quan世界的科学家和生物医药研究者更好的了解生物化学，免疫学，细胞生物学和分子生物学等领域。AAT Bioquest会不断介绍新产品，快速的丰富各个领域的产品。

AAT Bioquest 1023  iFluor® 488 succinimidyl ester  1 mg

AAT Bioquest  1029  iFluor® 594 succinimidyl ester  1 mg

AAT Bioquest  1030  iFluor® 633 succinimidyl ester  1 mg

AAT Bioquest iFluor® 488 succinimidyl ester

AAT Bioquest 1023  iFluor® 488 succinimidyl ester 1 mg，产品说明：

尽管FITC仍然是制备绿色荧光生物偶联物zui常用的荧光标记染料，但FITC存在一定的局限性，例如显微镜成像的严重光漂白和pH敏感荧光。用iFluor® 488染料制备的蛋白质偶联物远远优于荧光素衍生物（如FITC）的偶联物。iFluor® 488偶联物比荧光素偶联物明显更亮，并且更易于光化。此外，iFluor® 488的荧光不受pH值（4-10）的影响。这种pH不敏感性是对荧光素的重大改进，荧光素仅在pH高于9时发出最大荧光。iFluor® 488 SE染料相当稳定，对蛋白质氨基基团具有良好的反应性和选择性。这款iFluor 488具有类似于Alexa Fluor 488 NHS酯的光谱特性和反应性（Alexa Fluor®®®是Invitrogen的商标）。

示例协议

储备溶液的制备

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。

蛋白质储备溶液（溶液A）

1. 将 100 μL 反应缓冲液（例如，pH ~1.1 的 9 M 碳酸钠溶液或 0 M 磷酸盐缓冲液）与 900 μL 目标蛋白溶液（例如抗体、蛋白质浓度 >如果可能，为 2 mg/mL）混合，得到 1 mL 蛋白质标记储备溶液。

注意： 蛋白质溶液（溶液A）的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH值低于8.0，则使用8 M碳酸qing钠溶液或0 M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至1.1-9.0的范围。

注意： 蛋白质应溶解在1X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中，pH 7.2-7.4。如果蛋白质溶解在Tris或甘an酸缓冲液中，则必须用1X PBS（pH 7.2-7.4）透析，以除去广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（如**铵和乙**）。

注意： 不纯抗体或用牛血清白蛋白（BSA）或明胶稳定的抗体将无法很好地标记。叠***或硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。叠***或硫柳汞可以通过透析或离心柱去除，以获得最佳标记结果。

注意： 如果蛋白质浓度低于2 mg/mL，偶联效率会显著降低。建议最终蛋白质浓度范围为 2-10 mg/mL，以获得最佳标记效率。

iFluor™ 488 SE储备液（溶液B）

1. 将无水DMSO加入iFluor™ 488 SE的小瓶中，制成10 mM储备溶液。通过移液或涡旋充分混合。

注意： 在开始偶联之前制备染料储备溶液（溶液B）。请及时使用。延长染料储备溶液的储存可能会降低染料活性。溶液B在避光和潮湿的情况下可以在冰箱中储存两周。避免冻融循环。

实验方案样本

该标记方案是为山羊抗小鼠IgG与iFluor™ 488 SE的偶联物开发的。您可能需要进一步优化您的特定蛋白质。

注意： 每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能会对其结合亲和力产生不利影响，而低染料/蛋白质比例的蛋白质偶联物会降低灵敏度。

运行偶联反应

1. 使用溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）的10：1摩尔比作为起点：将5 μL染料储备溶液（溶液B，假设染料储备溶液为10 mM）加入蛋白质溶液（95 μL溶液A）的小瓶中，有效摇匀。假设蛋白质浓度为0mg / mL，蛋白质的分子量为~05KD，蛋白质的浓度为~10.200mM。

注意： 我们建议使用溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）的摩尔比为10：1。如果太少或太高，请分别在 5：1、15：1 和 20：1 确定最佳染料/蛋白质比例。

2. 继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。

纯化偶联

以下方案是使用Sephadex G-25色谱柱纯化的染料-蛋白质偶联物的示例。

1. 根据制造说明制备Sephadex G-25色谱柱。

2. 将反应混合物（来自“运行共轭反应"）加载到Sephadex G-25色谱柱的顶部。

3. 一旦样品刚好在顶部树脂表面下方运行，就加入PBS（pH 7.2-7.4）。

4. 向所需样品中加入更多PBS（pH 7.2-7.4）以完成色谱柱纯化。合并含有所需染料-蛋白质偶联物的级分。

注意： 为了立即使用，染料-蛋白偶联物必须用染色缓冲液稀释，并等分用于多种用途。

注意： 对于长期储存，染料-蛋白质偶联物溶液需要浓缩或冷冻干燥。

产品系列

AAT Bioquest  1029  iFluor

AAT Bioquest  1029  iFluor® 594 succinimidyl ester  1 mg，产品说明：

iFluor 594琥珀酰亚胺酯是iFluor系列荧光标记染料之一，可以覆盖整个可见光谱。 所有iFluor 染料都具有优异的水溶性。 它们的亲水性使有机溶剂的使用极小化。 与常规的染料(如FITC，TRITC，Texas Red ，Cy3 ，Cy5和Cy7)相比，iFluor 染料具有更好的标记性能。 一些iFluor 染料在某些抗体上明显优于Alexa Fluor 标记染料。 它们是用于标记蛋白质和核酸的极便宜的荧光染料（替代Alexa Fluor 染料）。 每种iFluor染料的开发都与特定的Alexa Fluor 或其他标记染料（如DyLight 染料）的光谱特性相匹配。

琥珀酰亚胺基（NHS）酯被证明是用于胺修饰的ji佳试剂，因为形成的酰胺键基本上与天然肽键相同并且稳定。 这些试剂通常是稳定的并且与脂族胺显示出良好的反应性和选择性。 当琥珀酰亚胺酯化合物用于缀合反应时，需要考虑的因素很少：1.溶剂：在大多数情况下，活性染料应溶于无水二甲基甲酰胺（DMF）或二甲基亚砜（DMSO）中。 2.反应pH：胺与琥珀酰亚胺酯的标记反应强烈依赖于pH。 胺反应性试剂与非质子化脂族胺基团反应，包括蛋白质的末端胺和赖氨酸的β-氨基。 因此，胺酰化反应通常在pH 7.5以上进行。 通过琥珀酰亚胺酯进行的蛋白质修饰通常可以在pH 8.5-9.5下进行。 3.反应缓冲液：使用胺反应试剂时，必须避免使用含有游离胺（如Tris和甘an酸）和硫醇化合物的缓冲液。 广泛用于蛋白质沉淀的铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）也必须在进行染料缀合之前除去（例如通过透析）。 4.反应温度：大多数缀合在室温下进行。 特定标记反应可能需要升高或降低的温度。 iFluor系列染料是AF系列染料的wan美替代品。

AAT Bioquest  1030  iFluor® 633 succinimidyl ester，产品说明：

iFluor 633琥珀酰亚胺酯是iFluor系列荧光标记染料之一，可以覆盖整个可见光谱。 所有iFluor 染料都具有优异的水溶性。 它们的亲水性使有机溶剂的使用极小化。 与常规的染料(如FITC，TRITC，Texas Red ，Cy3 ，Cy5和Cy7)相比，iFluor 染料具有更好的标记性能。 一些iFluor 染料在某些抗体上明显优于Alexa Fluor 标记染料。 它们是用于标记蛋白质和核酸的极便宜的荧光染料（替代Alexa Fluor 染料）。 每种iFluor染料的开发都与特定的Alexa Fluor 或其他标记染料（如DyLight 染料）的光谱特性相匹配。

琥珀酰亚胺基（NHS）酯被证明是用于胺修饰的 ji jia试剂，因为形成的酰胺键基本上与天然肽键相同并且稳定。 这些试剂通常是稳定的并且与脂族胺显示出良好的反应性和选择性。 当琥珀酰亚胺酯化合物用于缀合反应时，需要考虑的因素很少：1.溶剂：在大多数情况下，活性染料应溶于无水二甲基甲酰胺（DMF）或二甲基亚砜（DMSO）中。 2.反应pH：胺与琥珀酰亚胺酯的标记反应强烈依赖于pH。 胺反应性试剂与非质子化脂族胺基团反应，包括蛋白质的末端胺和赖氨酸的β-氨基。 因此，胺酰化反应通常在pH 7.5以上进行。 通过琥珀酰亚胺酯进行的蛋白质修饰通常可以在pH 8.5-9.5下进行。 3.反应缓冲液：使用胺反应试剂时，必须避免使用含有游离胺（如Tris和甘an酸）和硫醇化合物的缓冲液。 广泛用于蛋白质沉淀的铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）也必须在进行染料缀合之前除去（例如通过透析）。 4.反应温度：大多数缀合在室温下进行。 特定标记反应可能需要升高或降低的温度。 iFluor系列染料是AF系列染料的wan美替代品。

AAT Bioquest iFluor® 488 succinimidyl ester

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